PCR en la Neumonía por Neumococo

Tema: Detección y predicción de serotipos de Streptococcus pneumoniae directamente de hisopos nasofaríngeos mediante PCR

Objetivo: Evaluar la viabilidad de la detección basada en PCR y el serotipado de neumococos directamente en hisopos nasofaríngeos (NP) recolectados de forma rutinaria para estudios virales para agregar al repertorio de métodos sin cultivo utilizados para la vigilancia neumocócica.

Muestra: esputo y sangre 

Acido Nucleico: ADN genómico

Genes: lytA y cpsA

Tipo de PCR: cmPCR y rmPCR

Pasos: 

- Desnaturalización: 95 ° C durante 90 s

- Hibridación: 95 ° C durante 30 s

- Extensión: 54 ° C durante 90 s

- Extensión final: 72 ° C durante 10 min

Sensibilidad: 10 veces en PBS de varios S. pneumoniae 

Especificidad: 95% 

Visualización: Electroforesis en gel de agarosa al 1,2 % (p/v) con bromuro de etidio

       Figura 1: Resultados típicos obtenidos para las reacciones de cuatro cmPCRmod. Se indican los tamaños de amplicón (pb), al igual que el control positivo (PC), el control negativo (NC) y un control no tipificable (NT) que consiste en S. pneumoniae serotipo 19A. Los marcadores moleculares corresponden a la escalera de 100 pb (Invitrogen).

Referencia Bibliográfica:

1. Amanda LS Lang, Shelly A. McNeil, Todd F. Hatchette, May Elsherif , Irene Martin , Jason J. LeBlanc. Detection and prediction of Streptococcus pneumoniae serotypes directly from nasopharyngeal swabs using PCR. [Internet] Microbiology Society 2015. Disponible en: 

https://www.microbiologyresearch.org/content/journal/jmm/10.1099/jmm.0.000097;jsessionid=PsG9L1kvOwl8mEtqXJoF-ZAV.mbslive-10-240-10-183